Evaluación de la proteína recombinante DIIIE2J como ligando para el aislamiento de receptores celulares del virus del dengue

Resumen:
La fiebre por dengue y el dengue hemorrágico constituyen un gran problema de salud en Cuba el resto de los países tropicales y subtropicales. El desarrollo de estrategias antivirales basadas en el bloqueo de la interacción virus-célula hospedera se ve imposibiltado por el desconocimiento de la identidad molecular de los receptores celulares de estos patógenos. El aislamiento, identificación y caracterización de sus receptores se puede realizar mediante cromatografía de afinidad, para lo cual resulta imprescindible la selección de los ligandos más apropiados. Objetivos: Evaluar si la proteína recombinante DIIIE2J reproduce características estructurales y funcionales de este fragmento en la proteína E de manera que pueda ser empleada como ligando en estudios de aislamiento y caracterización del receptor celular del virus Dng2. Materiales y métodos: Preparaciones purificadas de DIIIE2J fueron sometidas a un estudio fisico-químico mediante cromatografía líquida de alta resolución para comprobar su homogeneidad. Además se realizó un análisis estructural de la misma mediante espectrometría de masas y se comprobó su estado de agregación a través de cromatografía de exclusión molecular. La caracterización antigénica se realizó mediante Western Blott, Dot Blott y ELISA empleando anticuerpos de origen humano y murino. La funcionalidad de la proteína fue analizada mediante un ensayo de unión a células BHIK-21, seguido por citometría de flujo. Resultados: Las preparaciones utilizadas de la proteína DIIIE2J poseen una gran homogeneidad y pureza. Esta proteína tiene el único puente S-S correctamente formado y la Met N-terminal está procesada. En las soluciones en que se ensayó, la misma se encuentra formando monómeros. DIIIE2J es reconocida por anticuerpos de ratón y humanos en los 3 formatos inmunoenzimáticos empleados y se une especificamente a la superficie de la células BHK-21. Conclusiones: La proteína recombinante DIIIE2J presenta un plegamiento que reproduce características estructurales y funcionales del dominio III de la proteína E de Dng2 por lo que constituye un ligando atractivo para emplear en ensayos de aislamiento y caracterización de los receptores celulares del virus en la superficie de las células.Etapa de aplicación se encuentra el trabajo: La presente investigación se terminó y se generalizará para caracterizar las proteínas recombinantes homólogas de los restantes 3 serotipos

DATOS GENERALES
Edición del FórumXV
ProvinciaHolguín
ComisiónBiotecnología e Industria Farmacéutica
OrganismoMINISTERIO DE SALUD PUBLICA
Palabras Claves PROTEINA RECOMBINANTE PROTEINAS ESPECTROMETRIA
AUTORES
Rodríguez Labrada, Roberto
Huerta Galindo, Vivian
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